ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಪ್ರಯೋಗ

ಪ್ರಯೋಗ ತತ್ವ

ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ವಿವಿಧ ಸಾಮಾನ್ಯ ಮತ್ತು ಅಸಹಜ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮತ್ತು ದೃಢೀಕರಿಸುವ ಗುರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ವಿಭಿನ್ನ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಪ್ರಕಾರಗಳ ವಿಭಿನ್ನ ಚಾರ್ಜ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಐಸೊಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್‌ಗಳಿಂದಾಗಿ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ pH ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ, ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ನ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದ pH ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾದಾಗ, ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಋಣಾತ್ಮಕ ಚಾರ್ಜ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಆನೋಡ್ ಕಡೆಗೆ ವಲಸೆ ಹೋಗುತ್ತದೆ. ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, ಧನಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದೊಂದಿಗೆ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಕ್ಯಾಥೋಡ್ ಕಡೆಗೆ ಚಲಿಸುತ್ತದೆ.

ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯದ ನಂತರ, ವಿಭಿನ್ನ ಶುಲ್ಕಗಳು ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್‌ಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ವಲಸೆ ದಿಕ್ಕುಗಳು ಮತ್ತು ವೇಗಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ. ಇದು ವಿಭಿನ್ನ ವಲಯಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ನಂತರದ ವರ್ಣಮಾಪನ ಅಥವಾ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ವಿವಿಧ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಈ ವಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಮಾಡಬಹುದು. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ pH 8.6 ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್.

ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನೊಳಗೆ, ಗ್ಲೈಕೊಜೆನ್ ಅಥವಾ ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಪದಾರ್ಥಗಳಲ್ಲಿ ಇರುವ ಎಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಗುಂಪುಗಳು (CHOH-CHOH) (ಮ್ಯೂಕೋಪೊಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ಗಳು, ಮ್ಯೂಕೋಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಗ್ಲೈಕೋಲಿಪಿಡ್‌ಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ.) ಆವರ್ತಕ ಆಮ್ಲದಿಂದ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಲ್ಡಿಹೈಡ್ ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (CHO-CHO). ಈ ಆಲ್ಡಿಹೈಡ್ ಗುಂಪುಗಳು ಬಣ್ಣರಹಿತ ಕೆನ್ನೀಲಿ-ಕೆಂಪು ಸ್ಕಿಫ್ ಕಾರಕದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜನೆಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ಕೋಶದಲ್ಲಿ ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ಗಳು ಇರುವಲ್ಲಿ ಠೇವಣಿ ಮಾಡುವ ನೇರಳೆ-ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ. ಈ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪಿರಿಯಾಡಿಕ್ ಆಸಿಡ್-ಸ್ಕಿಫ್ (PAS) ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಹಿಂದೆ ಗ್ಲೈಕೋಜೆನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು.

ಪ್ರಯೋಗ ವಿಧಾನ

ಸಾಮಗ್ರಿಗಳು:ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್memಬ್ರೇನ್, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಉಪಕರಣ(DYCP-38C ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಸರಬರಾಜು DYY-6C), ಉನ್ನತ ಮಾದರಿ ಲೋಡ್ ಟೂಲ್(ಪೈಪೆಟ್), ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್, ಕಲರ್ಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕ್ಯೂವೆಟ್‌ಗಳು, ಬಫರ್‌ಗಳು.

ಬಫರ್:

(1) pH 8.6 TEB ಬಫರ್: 10.29 ಗ್ರಾಂ ಟ್ರಿಸ್, 0.6 ಗ್ರಾಂ ಇಡಿಟಿಎ, 3.2 ಗ್ರಾಂ ಬೋರಿಕ್ ಆಸಿಡ್, ಮತ್ತು 1000 ಮಿಲಿಗೆ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.

(2) ಬೋರೇಟ್ ಬಫರ್: 6.87 ಗ್ರಾಂ ಬೋರಾಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 5.56 ಗ್ರಾಂ ಬೋರಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ತೂಕ, ಮತ್ತು 1000 ಮಿಲಿಗೆ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.

ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ:

Pಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಪರಿಹಾರದ ಪರಿಹಾರ

ಹೆಪಾರಿನ್ ಅಥವಾ ಸೋಡಿಯಂ ಸಿಟ್ರೇಟ್ ಹೊಂದಿರುವ 3 ಮಿಲಿ ರಕ್ತವನ್ನು ಹೆಪ್ಪುರೋಧಕವಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ. 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 2000 rpm ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಾವನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ. ಕೆಂಪು ರಕ್ತ ಕಣಗಳನ್ನು ಶಾರೀರಿಕ ಲವಣಯುಕ್ತವಾಗಿ ಮೂರು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ (750 ಆರ್‌ಪಿಎಂ, ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ). 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 2200 rpm ನಲ್ಲಿ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ. ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣದ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ನಂತರ ಕಾರ್ಬನ್ ಟೆಟ್ರಾಕ್ಲೋರೈಡ್ನ ಪರಿಮಾಣದ 0.5 ಪಟ್ಟು ಸೇರಿಸಿ. ನಂತರದ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಮೇಲಿನ Hb ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಲವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ, ತದನಂತರ 2200 rpm ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.

ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ನೆನೆಸುವುದು

ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು 3 cm × 8 cm ಅಳತೆಯ ಪಟ್ಟಿಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಿ. ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಆಗುವವರೆಗೆ ಅವುಗಳನ್ನು pH 8.6 TEB ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಿ, ನಂತರ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್‌ನಿಂದ ಒಣಗಿಸಿ.

ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ

10 μl ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಲಂಬವಾಗಿ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ (ಒರಟು ಬದಿ) ಮೇಲೆ ಗುರುತಿಸಲು ಪೈಪೆಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ, ಅಂಚಿನಿಂದ ಸುಮಾರು 1.5 ಸೆಂ.ಮೀ.

ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್

ಬೋರೇಟ್ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಚೇಂಬರ್‌ಗೆ ಸುರಿಯಿರಿ. ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ಮಚ್ಚೆಯುಳ್ಳ ಬದಿಯೊಂದಿಗೆ ಕೋಣೆಯ ಕ್ಯಾಥೋಡ್ ತುದಿಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ. 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 200 V ನಲ್ಲಿ ರನ್ ಮಾಡಿ.

ಎಲುಶನ್

HbA ಮತ್ತು HbA2 ವಲಯಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ, ಅವುಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪರೀಕ್ಷಾ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕ್ರಮವಾಗಿ 15 ಮಿಲಿ ಮತ್ತು 3 ಮಿಲಿ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಹೊರಹಾಕಲು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ, ನಂತರ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.

ವರ್ಣಮಾಪನ

ಎಲುಷನ್ ದ್ರಾವಣಕ್ಕಾಗಿ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಶೂನ್ಯಗೊಳಿಸಿ ಮತ್ತು 415 nm ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ.

ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ

HbA2(%) = HbA2 ಟ್ಯೂಬ್‌ನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ / (HbA ಟ್ಯೂಬ್‌ನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ × 5 + HbA2 ಟ್ಯೂಬ್‌ನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ) × 100%

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ

pH 8.6 TEB ಬಫರ್ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ಗಾಗಿ ಉಲ್ಲೇಖ ಶ್ರೇಣಿ: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು

ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯವು ತುಂಬಾ ಉದ್ದವಾಗಿರಬಾರದು. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಒಣಗಬಾರದು. HbA ಮತ್ತು HbA2 ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಬೇರ್ಪಟ್ಟಾಗ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಿ. ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಪ್ರಸರಣ ಮತ್ತು ಮಸುಕಾಗುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.

ಹೆಚ್ಚು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ. ಮಿತಿಮೀರಿದ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ದ್ರವವು ಬ್ಯಾಂಡ್ ಬೇರ್ಪಡುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಸಾಕಷ್ಟು ಕಲೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು, ಇದು ತಪ್ಪಾಗಿ HbA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಪೊರೆಯ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಡೆಯಿರಿ.

ಪ್ರಸ್ತುತವು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಿರಬಾರದು; ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ಪ್ರತ್ಯೇಕಗೊಳ್ಳುವುದಿಲ್ಲ.

ಯಾವಾಗಲೂ ಸಾಮಾನ್ಯ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಅಸಹಜ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್‌ಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಾಗಿ ಸೇರಿಸಿ.

ಬೀಜಿಂಗ್ ಲಿಯುಯಿ ಬಯೋಟೆಕ್ನಾಲಜಿಯು ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ಗಾಗಿ ವೃತ್ತಿಪರ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಟ್ಯಾಂಕ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸುತ್ತದೆ, ಅದು ಮಾದರಿಯಾಗಿದೆDYCP-38Cಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಟ್ಯಾಂಕ್, ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಟ್ಯಾಂಕ್‌ಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ವಿದ್ಯುತ್ ಪೂರೈಕೆಯ ಎರಡು ಮಾದರಿಗಳು ಲಭ್ಯವಿದೆDYY-2Cಮತ್ತುDYY-6Cವಿದ್ಯುತ್ ಸರಬರಾಜು.

ಏತನ್ಮಧ್ಯೆ, ಬೀಜಿಂಗ್ ಲಿಯುಯಿ ಬಯೋಟೆಕ್ನಾಲಜಿ ಗ್ರಾಹಕರಿಗೆ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಕಸ್ಟಮೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾಹಿತಿಗಾಗಿ ನಮ್ಮನ್ನು ಕೇಳಲು ಸುಸ್ವಾಗತ.

ಬೀಜಿಂಗ್ ಲಿಯುಯಿ ಬ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಚೀನಾದಲ್ಲಿ 50 ವರ್ಷಗಳ ಇತಿಹಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಕಂಪನಿಯು ಪ್ರಪಂಚದಾದ್ಯಂತ ಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು. ವರ್ಷಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ಮೂಲಕ, ಇದು ನಿಮ್ಮ ಆಯ್ಕೆಗೆ ಯೋಗ್ಯವಾಗಿದೆ!

ನಾವು ಈಗ ಪಾಲುದಾರರನ್ನು ಹುಡುಕುತ್ತಿದ್ದೇವೆ, OEM ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಟ್ಯಾಂಕ್ ಮತ್ತು ವಿತರಕರನ್ನು ಸ್ವಾಗತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ನಮ್ಮ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಗೆ ನೀವು ಯಾವುದೇ ಖರೀದಿ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ನಮ್ಮನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಲು ಹಿಂಜರಿಯಬೇಡಿ. ನೀವು ಇಮೇಲ್ ಮೂಲಕ ನಮಗೆ ಸಂದೇಶವನ್ನು ಕಳುಹಿಸಬಹುದು[ಇಮೇಲ್ ಸಂರಕ್ಷಿತ]ಅಥವಾ[ಇಮೇಲ್ ಸಂರಕ್ಷಿತ], ಅಥವಾ ದಯವಿಟ್ಟು ನಮಗೆ +86 15810650221 ಗೆ ಕರೆ ಮಾಡಿ ಅಥವಾ Whatsapp +86 15810650221 ಸೇರಿಸಿ, ಅಥವಾ Wechat: 15810650221